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食用菌原種的滅菌、接種與培養

文章主題:食用菌種植技術  文章來源:農業百科  發布時間:2017-09-20

(1)滅菌

分裝好的原種瓶,要當天滅菌,以免培養基發霉變質。滅菌方法有二種,即高壓蒸汽滅菌和常壓蒸汽滅菌。

①高壓蒸汽滅菌。先將鍋內加入足夠的水,將菌種瓶整齊地排放在鍋內,蓋上鍋蓋,對角擰緊鍋蓋上的螺絲,勿使漏氣。用電爐或者煤火加熱,當壓力達到0.05兆帕時,打開放氣閥(或開始就打開放氣閥),排空鍋內冷空氣,放氣10-15分鐘左右,再關閉放氣閥繼續加熱,當壓力升到0.15兆帕時,調整火力使壓力維持在0.14-0.15兆帕下滅菌。麥粒和谷粒培養基滅菌120分鐘;棉籽殼、玉米芯、木屑培養基滅菌90-100分鐘。滅菌完畢,關閉熱源,待壓力自然降到0時,打開放氣閥將鍋內空氣排盡后,再打開鍋蓋取出菌種瓶。

②常壓蒸汽滅菌。鍋內加足水,先用大火加熱,使蒸汽上足后,用小火保持沸點溫度。在loo℃左右的沸點溫度下維持12-16小時以上,停火燜1夜后出鍋。麥粒和谷粒培養基滅菌時間要相應延長。為了確保滅菌效果,麥粒和谷粒培養基最好不要采用常壓滅菌法。

(2)接種

①培養基冷卻。將滅過菌的培養基從鍋內取出,置于干凈的室內冷卻,待滅過菌的培養基溫度降至30℃以下時,搬入消毒好的接種箱(室)內消毒接種。

②接種場地的消毒。在接種前先對接種場地和接種設施進行徹底的清潔,然后用甲醛加高錳酸鉀或者克霉靈等氣霧消毒劑熏蒸消毒30分鐘。再將滅過菌的料瓶和接種用具(酒精燈和接種鉤等)一同放入接種室(箱)內,用甲醛加高錳酸鉀再一次進行熏蒸消毒,同時配合紫外燈照射消毒等方法。具體消毒方法及藥品用量參見“母種的轉接”。

③接種方法。首先將母種試管外壁用75%的酒精棉球表面消毒后帶入接種室(箱);點燃酒精燈,用75%的酒精棉球再次對試管外壁和管口處表面消毒:取下試管棉塞后,試管口在火焰上燒一下,然后用經火焰滅菌并已冷涼的接種鉤將母種斜面分成6-8份,在酒精燈火焰形成的無菌區內,用接種鉤取一份母種迅速準確地放入料瓶內的接種穴處,棉塞過火后塞好,包上包頭紙。如此反復,每支母種可擴接原種6-8瓶。接完種,貼上標簽。

(3)培養

將接種好的原種放置培養室內進行培養,培養室要求干燥、黑暗、通風良好,溫度控制在20℃ -24℃,空氣相對濕度在60%左右。培養期間每周檢查1次菌絲生長情況和雜菌發生情況,若發現有污染的菌種瓶應立即淘汰,并隔離污染源。

一般在適溫下30天左右菌絲即可發滿菌種瓶,菌絲長滿后,盡快使用;若暫時不用,也可置于低溫、干燥條件下短期保存。

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